ICS
07.140
CCS
C06 SF
中華人民共和國司法行政行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)
SF/T 0178—2024
代替 SF/Z JD0107018—2018
血液中溴敵隆等13種抗凝血類殺鼠藥的液相色譜-質(zhì)譜定性定量檢驗方法
Qualitative and quantitative determination of 13 anticoagulant rodenticides including bromadiolone in blood by liquid chromatography-mass spectrometry
2024 - 12 - 30發(fā)布
2025 - 06 - 01實施
中華人民共和國司法部 發(fā)布
SF/T 0178—2024
I
目次
前言 ................................................................................. II
1 范圍 ............................................................................... 1
2 規(guī)范性引用文件 ..................................................................... 1
3 術(shù)語和定義 ......................................................................... 1
4 原理 ............................................................................... 1
5 試劑、儀器和設(shè)備 ................................................................... 1
6 定性分析 ........................................................................... 2
7 定量分析 ........................................................................... 4
8 分析結(jié)果評價 ....................................................................... 5
附錄A（資料性） 目標(biāo)物的相關(guān)信息及方法線性范圍、檢出限與定量限 ....................... 7
SF/T 0178—2024
II
前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。
本文件代替SF/Z JD0107018—2018《血液中溴敵隆等13種抗凝血類殺鼠藥的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗方法》，與SF/Z JD0107018—2018相比，除結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動外，主要技術(shù)變化如下：
a)
增加了目標(biāo)物的“英文名稱”（見附錄A）；
b)
增加了目標(biāo)物的“CAS號”（見附錄A）。
請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。
本文件由司法鑒定科學(xué)研究院提出。
本文件由司法部信息中心歸口。
本文件起草單位：司法鑒定科學(xué)研究院、四川大學(xué)、華中科技大學(xué)。
本文件主要起草人：嚴(yán)慧、喬正、劉偉、廖林川、黃垂秀、葉懿、林瑤、向平、沈保華、王鑫、卓先義、沈敏、吳何堅。
本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：
——
2018年首次發(fā)布為SF/Z JD0107018—2018；
——
本次為第一次修訂。
SF/T 0178—2024
1
血液中溴敵隆等13種抗凝血類殺鼠藥的液相色譜-質(zhì)譜
定性定量檢驗方法
1 范圍
本文件描述了血液中溴敵隆、溴鼠靈、克滅鼠、異殺鼠酮、殺鼠酮、華法林、殺鼠醚、氯殺鼠靈、敵鼠、敵害鼠、氯鼠酮、鼠得克和氟鼠靈13種抗凝血類殺鼠藥的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗方法，包括原理，試劑、儀器和設(shè)備，定性分析，定量分析以及分析結(jié)果評價。
本文件適用于血液中溴敵隆、溴鼠靈、克滅鼠、異殺鼠酮、殺鼠酮、華法林、殺鼠醚、氯殺鼠靈、敵鼠、敵害鼠、氯鼠酮、鼠得克和氟鼠靈13種抗凝血類殺鼠藥的定性分析和定量分析。
2 規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
GA/T 122 毒物分析名詞術(shù)語
3 術(shù)語和定義
GA/T 122界定的術(shù)語和定義適用于本文件。
4 原理
血液樣品經(jīng)乙酸乙酯液液提取后，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測，經(jīng)與平行操作的空白樣品和添加樣品作對照，以保留時間、質(zhì)譜特征離子對峰和離子對豐度比進(jìn)行定性分析；以定量離子對峰面積或峰面積比值為依據(jù)，采用外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析。
5 試劑、儀器和設(shè)備 試劑
試驗用水應(yīng)為符合GB/T 6682規(guī)定的一級水。所用試劑及要求如下。
a)
甲醇：色譜純。
b)
乙酸銨：色譜純。
c)
乙酸乙酯：分析純。
d)
丙酮：色譜純。
e)
含5%甲醇的10 mmol/L乙酸銨溶液：分別取乙酸銨0.77 g和甲醇50 mL，置于1000 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻備用。
f)
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液：
1)
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲備溶液：分別精密稱取溴敵隆、溴鼠靈、克滅鼠、華法林、殺鼠醚、氯殺鼠靈、敵害鼠、鼠得克和氟鼠靈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量，用甲醇配制成1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲備溶液。分別精密稱取異殺鼠酮、殺鼠酮、敵鼠和氯鼠酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量，用丙酮配制成1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲備溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，有效期12個月，或采用市售標(biāo)準(zhǔn)溶液；
2)
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液：試驗中所用其他濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液均由符合5.1 f）1）的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲備溶液用甲醇稀釋得到。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期3個月。
g)
內(nèi)標(biāo)溶液：
SF/T 0178—2024
2
1)
內(nèi)標(biāo)儲備溶液：市售100 μg/mL華法林-d5（或其他合適內(nèi)標(biāo)物）內(nèi)標(biāo)儲備溶液，置于冰箱冷凍保存，有效期12個月；
2)
內(nèi)標(biāo)工作溶液：100 ng/mL的華法林-d5內(nèi)標(biāo)工作溶液由符合5.1 g）1）的內(nèi)標(biāo)儲備溶液用甲醇稀釋得到。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期3個月。 儀器和設(shè)備
儀器和設(shè)備及要求如下。
a)
液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。
b)
電子天平：分度值≤0.1 mg。
c)
旋渦混合器。
d)
離心機(jī)。
e)
恒溫水浴鍋。
f)
移液器。
6 定性分析 樣品前處理
6.1.1 檢材樣品
取血液1 mL，加入內(nèi)標(biāo)工作溶液10 μL，加入乙酸乙酯3 mL，渦旋混勻，2500 r/min離心3 min，轉(zhuǎn)移乙酸乙酯層。檢材樣品中再加入乙酸乙酯3 mL，渦旋混勻，2500 r/min離心3 min，轉(zhuǎn)移乙酸乙酯層，合并兩次的乙酸乙酯提取液，于60 ℃水浴中吹干，殘留物用甲醇100 ?L復(fù)溶，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。
6.1.2 空白樣品
取空白血液1 mL作為空白樣品，按照6.1.1的方法，與檢材樣品平行操作。
6.1.3 添加樣品
取空白血液1 mL，添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液，配制成2 ng/mL的添加樣品，然后按6.1.1的方法，與檢材樣品平行操作。 儀器檢測
6.2.1 儀器條件
6.2.1.1 液相色譜條件
以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器等實際情況進(jìn)行調(diào)整。
a)
色譜柱：C18柱（100 mm×2.1 mm，3.5 μm）或其他等效柱。
b)
流動相：流動相A為含5%甲醇的10 mmol/L乙酸銨溶液，流動相B為甲醇；采用梯度洗脫，梯度洗脫程序見表1。
c)
流速：0.2 mL/min。
d)
柱溫：室溫。
e)
進(jìn)樣量：5 μL。
表
1 流動相梯度洗脫程序
時間
min
流動相A
流動相B
0
80%
20%
1.5
80%
20%
3.0
40%
60%
5.0
40%
60%
SF/T 0178—2024
3
表1 流動相梯度洗脫程序（續(xù)）
時間
min
流動相A
流動相B
5.5
15%
85%
7.5
15%
85%
10.0
80%
20%
6.2.1.2 質(zhì)譜條件
6.2.1.2.1
以下為參考條件，可根據(jù)不同品牌儀器等實際情況進(jìn)行調(diào)整。
a)
離子源：電噴霧電離-負(fù)離子模式（ESI-）。
b)
檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。
c)
離子源電壓：-4500 V。
d)
碰撞氣、氣簾氣、霧化氣和輔助氣均為高純氮氣，使用前調(diào)節(jié)各氣流流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求。
e)
去簇電壓和碰撞能量優(yōu)化至最佳靈敏度。
6.2.1.2.2
在符合6.2.1.1和6.2.1.2的液相色譜條件和質(zhì)譜條件下，目標(biāo)物和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜參數(shù)和保留時間參見表2。
表
2 目標(biāo)物和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜參數(shù)和保留時間
目標(biāo)物
定性離子對
m/z
去簇電壓
V
碰撞能量
eV
保留時間
min
克滅鼠
297.1＞161.1*
-65
-25
4.8
297.1＞210.7
-42
異殺鼠酮
229.0＞144.7*
-80
-32
5.3
229.0＞116.0
-49
殺鼠酮
229.1＞116.0*
-80
-46
5.3
229.1＞172.0
-28
華法林
307.2＞160.8*
-70
-29
5.4
307.2＞250.0
-31
殺鼠醚
291.1＞140.9*
-86
-37
5.7
291.1＞247.0
-30
氯殺鼠靈
341.0＞161.0*
-75
-30
6.2
341.0＞283.8
-34
敵鼠
339.1＞167.1*
-100
-34
6.7
339.1＞145.2
-32
敵害鼠
335.1＞160.8*
-40
-18
6.8
335.1＞335.1
-10
氯鼠酮
373.0＞200.9*
-60
-31
7.4
373.0＞145.2
-33
溴敵隆
525.1＞250.1*
-90
-52
7.8
525.1＞272.9
-50
鼠得克
443.3＞135.0*
-100
-46
8.0
443.3＞293.2
-44
氟鼠靈
541.3＞382.3*
-100
-36
8.2
541.3＞161.1
-48
溴鼠靈
521.1＞134.9*
-95
-54
8.7
521.1＞187.0
-52
華法林-d5（內(nèi)標(biāo)物）
312.2＞161.0*
-75
-28
5.4
312.2＞255.0
-33
注：
帶*的離子對為定量離子對。
6.2.2 進(jìn)樣
分別吸取空白樣品提取液、檢材樣品提取液和添加樣品提取液，按6.2.1的條件進(jìn)樣分析。 記錄
SF/T 0178—2024
4
記錄空白樣品、檢材樣品和添加樣品中目標(biāo)物可疑色譜峰的保留時間、質(zhì)譜特征離子對和離子對豐
度比。
定性判斷依據(jù)
以保留時間、質(zhì)譜特征離子對峰和離子對豐度比作為定性判斷依據(jù)。
若檢材樣品中出現(xiàn)目標(biāo)物的兩對定性離子對的色譜峰，保留時間與添加樣品中相應(yīng)目標(biāo)物的色譜
峰保留時間比較，相對誤差在±2.5%內(nèi)，且定性離子對豐度比與添加樣品的離子對豐度比之相對誤差不
超過表3規(guī)定的范圍，則可判斷檢材樣品中檢出該種目標(biāo)物。
表3 離子對豐度比的最大允許相對誤差
離子對豐度比 ＞50% ＞20%～50% ＞10%～20% ≤10%
允許的相對誤差 ±20% ±25% ±30% ±50%
7 定量分析
樣品前處理
取檢材樣品血液1 mL兩份，按6.1.1的方法操作。
另取空白血液樣品若干份，添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作溶液適量，制得系列質(zhì)量濃度或單點質(zhì)量濃度的添加
樣品，與檢材樣品平行操作。目標(biāo)物的相關(guān)信息及方法線性范圍、檢出限與定量限見附錄A。
檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度需在工作曲線的線性范圍內(nèi)。配制單點質(zhì)量濃度的添加樣品時，檢材
樣品中目標(biāo)物質(zhì)量濃度應(yīng)在添加樣品目標(biāo)物質(zhì)量濃度的（100±50）%范圍內(nèi)。
儀器檢測
7.2.1 儀器條件
儀器條件應(yīng)符合6.2.1的要求。
7.2.2 進(jìn)樣
分別將檢材樣品、系列質(zhì)量濃度的添加樣品或單點質(zhì)量濃度添加樣品，按6.2.1的條件進(jìn)樣分析。
記錄與計算
7.3.1 基本要求
記錄檢材樣品、系列質(zhì)量濃度的添加樣品或單點質(zhì)量濃度添加樣品中目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)物（內(nèi)標(biāo)法）的
峰面積值，然后計算檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度。
7.3.2 外標(biāo)法
7.3.2.1 外標(biāo)-工作曲線法
在系列濃度的添加樣品中，以目標(biāo)物定量離子對的峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)、目標(biāo)物質(zhì)量濃度（C）
為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性方程。
根據(jù)檢材樣品中目標(biāo)物的峰面積值，按式（1）計算檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度。
b
Y a
C
?
= ………………………………………………（1）
式中：
C??檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；
Y??檢材樣品中目標(biāo)物的峰面積值；
a??線性方程的截距；
b??線性方程的斜率。
7.3.2.2 外標(biāo)-單點校正法
根據(jù)檢材樣品和添加樣品中目標(biāo)物的峰面積值，按式（2）計算檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度。
SF/T 0178—2024
5
′A
A c
C
?
= ………………………………………………（2）
式中：
C ??檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；
A ??檢材樣品中目標(biāo)物的峰面積值；
A′??添加樣品中目標(biāo)物的峰面積值；
c ??添加樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）。
7.3.3 內(nèi)標(biāo)法
7.3.3.1 內(nèi)標(biāo)-工作曲線法
在系列質(zhì)量濃度的添加樣品中，以目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積比值（Y）為縱坐標(biāo)、目標(biāo)
物質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性方程。
根據(jù)檢材樣品中目標(biāo)物及內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積比值，按式（3）計算檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)
量濃度。
b
Y a
C
?
= ………………………………………………（3）
式中：
C??檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；
Y??檢材樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積比值；
a??線性方程的截距；
b??線性方程的斜率。
7.3.3.2 內(nèi)標(biāo)-單點校正法
根據(jù)檢材樣品和添加樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物定量離子對的峰面積比值，按式（4）計算檢材樣品中
目標(biāo)物的質(zhì)量濃度。
A′
A c
C
?
= ………………………………………………（4）
式中：
C ??檢材樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；
A ??檢材樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值；
A′??添加樣品中目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值；
c ??添加樣品中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）。
7.3.4 計算相對相差
檢材樣品平行測定兩份，相對相差按式（5）計算。
RD ＝ 100 1 2
?
?
C
C C
%…………………………………（5）
式中：
RD ??相對相差；
C1、C2 ??兩份檢材樣品目標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；
C
——
??兩份檢材樣品中目標(biāo)物質(zhì)量濃度的平均值（C1+C2）/2，單位為納克每毫升（ng/mL）。
8 分析結(jié)果評價
定性分析結(jié)果評價
8.1.1 陰性結(jié)果評價
陰性結(jié)果評價包括：
a) 若檢材樣品中僅檢出內(nèi)標(biāo)物，未檢出目標(biāo)物，且添加樣品中檢出目標(biāo)物，則陰性結(jié)果可靠；
SF/T 0178—2024
6
b)
若檢材樣品中未檢出內(nèi)標(biāo)物，或添加樣品中未檢出目標(biāo)物，則陰性結(jié)果不可靠，應(yīng)按第6章的規(guī)定重新檢驗。
8.1.2 陽性結(jié)果評價
陽性結(jié)果評價包括：
a)
若檢材樣品中檢出目標(biāo)物，且空白樣品無干擾，則陽性結(jié)果可靠；
b)
若檢材樣品中檢出目標(biāo)物，空白樣品亦呈陽性，則陽性結(jié)果不可靠，應(yīng)按第6章的規(guī)定重新檢驗。 定量分析結(jié)果評價
兩份檢材樣品中目標(biāo)物質(zhì)量濃度的相對相差不超過20%（腐敗檢材不超過30%）時，結(jié)果按兩份檢材樣品的平均值計算，否則應(yīng)重新測定。
SF/T 0178—2024
7
A
A
附錄A （資料性） 目標(biāo)物的相關(guān)信息及方法線性范圍、檢出限與定量限
目標(biāo)物的相關(guān)信息及方法線性范圍、檢出限與定量限見表A.1。
表
A.1 目標(biāo)物的相關(guān)信息及方法線性范圍、檢出限與定量限
中文名稱
英文名稱
CAS號
線性范圍
ng/mL
檢出限
ng/mL
定量限
ng/mL
克滅鼠
Coumafuryl
117-52-2
0.5～50
0.2
0.5
異殺鼠酮
Valone
83-28-3
0.5～50
0.2
0.5
殺鼠酮
Pindone
83-26-1
0.5～50
0.2
0.5
華法林
Warfarin
81-81-2
0.5～50
0.2
0.5
殺鼠醚
Coumatetralyl
5836-29-3
0.5～50
0.2
0.5
氯殺鼠靈
Coumachlor
81-82-3
0.5～50
0.2
0.5
敵鼠
Diphacinone
82-66-6
0.5～50
0.2
0.5
敵害鼠
Dicumarol
66-76-2
0.5～50
0.2
0.5
氯鼠酮
Chlorophacinone
3691-35-8
0.5～50
0.2
0.5
溴敵隆
Bromadiolone
28772-56-7
0.5～50
0.2
0.5
鼠得克
Difenacoum
56073-07-5
0.5～50
0.2
0.5
氟鼠靈
Flocoumafen
90035-08-8
0.5～50
0.2
0.5
溴鼠靈
Brodifacoum
56073-10-0
0.5～50
0.2
0.5
